Изучение противогрибковой эффективности дымовой шашки «MycetoDez»

Изучение противогрибковой эффективности дымовой шашки «MycetoDez»

Применение эффективных средств дезинфекции является одной из важных задач обеспечения биологической безопасности птицеводческих хозяйств. В статье приведены результаты изучения эффективности противогрибкового препарата «MycetoDez» в опытах in vitro и при производственных испытаниях.

В микробиоценозе животноводческих помещений значительное место занимают грибковые микроорганизмы, в основном – плесени. Подобно дрожжам и бактериям плесени и их споры распространены повсеместно и могут вызывать специфические заболевания в организме животных и птиц, рыб, пчел, растений и человека. Многие микозы инфекционны, а некоторые из них контагиозны и представляют опасность. К наиболее значимым возбудителям относят такие грибки как Penicillium chysogenum Thom., P. brevicompactum Dierckx, Aspergillus niger v.Thiegh., A. Flavus Lk., Aspergillus fumigatus, Stachybotrys chartarum (Ehrenb), S. hunghes, которые вызывают аллергию и респираторные заболевания [1].

Aspergillus fumigatus – возбудитель довольно часто встречающихся инфекций легких у птиц, не так уж редки случаи заболевания аспергиллезом и у человека [2]. Плесневый грибок содержится в заплесневелом сене, опилках, соломе, зерне, мякине, отрубях, жмыхе, комбикормах, а также на стенах и оборудовании при повышенной влажности. Аспергиллезу подвержены все птицы в любом возрасте. Он может начаться даже в эмбриональный период. Обычно это происходит, если для инкубации используют яйца с грязной скорлупой, либо мытые, но при несоблюдении правил дезинфекции. У молодняка птиц аспергиллез проявляется в возрасте 3-4 недель. При остром течении смертность достигает 50 %, причем птица погибает в течение 2 суток. Взрослые куры переносят аспергиллез легче, хотя у них и отмечается снижение продуктивности, слабость, истощение. Переболевшая птица становится хроническим носителем спор. Такие разновидности аспергиллеза, как аспергиллезный энцефалит и менингит, почти в 100 % случаев имеют летальный исход [3, 4]. 


Наряду с возможным развитием грибкового заболевания, патогенные грибки вырабатывают токсины, что также является экономически значимой проблемой современного птицеводства.

Высокопродуктивные породы птицы чрезвычайно чувствительны к микотоксинам. Длительное потребление слабо контаминированных микотоксинами рационов, в течение продолжительного периода времени, не всегда проявляется очевидными клиническими признаками, но, безусловно, приводит к снижению продуктивности.

Отрицательное влияние на птиц проявляется понижением естественной резистентности, иммунного статуса, что ведет к задержке роста и развития организма.

Снижение роста происходит из-за подавления синтеза белков и деструкции аминокислот. Организм птицы при дезактивации микотоксинов использует свободные аминокислоты плазмы крови в качестве источника энергии. В результате происходит дисбаланс аминокислот в крови, что приводит к торможению синтеза белка, снижению выработки антител и, как следствие, к понижению резистентности организма[5].

В литературе имеются данные применения пробиотических микроорганизмов для профилактики и уменьшения негативного влияния микотоксинов на птицу [5], однако эффективных методов лечения и профилактики заболеваний, вызванных патогенными грибками на сегодняшний день нет.

Наиболее оправданным методом борьбы с патогенными микроорганизмами является дезинфекция животноводческих помещений.

Учитывая вышесказанное, актуальной задачей является изыскание и разработка препаратов, обладающих фунгицидным и/или фунгистатическим действием, с целью применения их для дезинфекции животноводческих помещений.

В ТОО ≪Казфармаком≫ был разработан термовозгонный дезинфицирующий противогрибковый препарат ≪MycetoDez≫, шашка дымовая, где в качестве активнодействующего вещества выступает энилконазол – синтетическое антимикотическое средство. Ингибируя биосинтез эргостерина, триглицеридов, фосфолипидов вызывает губительное действие в отношении патогенных грибов.

Фунгицидную активность противогрибкового препарата ≪MycetoDez≫ изучали на эталонных штаммах Candida albicans ATCC 10231, Aspergillusbrasiliensis ATCC 16404 методом двукратных разведений в микропробирках типа Eppendorf, согласно CLSI M38-2A ≪Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi≫, 2-nd Edition [6]. Для тестирования использовали бульон и агар Сабуро.

Суспензию тест-штаммов микроорганизмов готовили непосредственно перед проведением исследования. Для исследования брали только культуры в экспоненциальной фазе роста. Окончательная концентрация суспензии тестштаммов составляла ~ 5х106 КОЕ/мл.

Исследуемые концентрации препарата от 2000 мкг/мл до 0,125 мкг/мл. Та концентрация, которая приводила к полному отсутствию роста тест-штаммов, принималась за минимальную фунгицидную активность. Контролем служил рост тест-штамма без препарата.


Микробиологический мониторинг воздуха производственных помещений до и после применения MycetoDez определяли в инкубаторах птицеводческого хозяйства АО "Алатау-Кус". 

Санацию инкубаторов проводили методом термической возгонки препарата. Для проведения обработок испытуемый препарат располагали равномерно в разных частях инкубатора на несгораемой поверхности и поджигали бытовой спичкой. При возгорании термовозгонных композиций образовывался аэрозоль серо-молочного цвета с характерным запахом костра. Препарат применяли согласно рекомендуемым дозировкам – 1 флакон на 50 м2. Обработка проводилась однократно. Отбор проб воздуха для бактериологического контроля после дезинфекции осуществляли через 30 минут (инкубатор № 2) и 12 часов (инкубатор № 1) после дезинфекции.

Взятие пробы воздуха осуществлялось при помощи портативного прибора для микробиологического контроля воздуха AirPort MD8 (Sartorius). Отбор воздуха осуществлялся через фильтры из желатина с диаметром пор 0,22 мкмв течение 5 минут со скоростью потока воздуха 50 л/мин с последующим их нанесением на чашки Петри, содержащие питательный агар Сабуро. Среды с фильтрами помещали в охладительный термостат (Binder KT115) на 5 суток при температуре 22 Ѓ} 1 oС. Предварительный подсчет выросших колоний производили через 72 ч, окончательный – через120 ч. Производился подсчет общего числа выросших КОЕ на агаре.

Расчет концентрации микроорганизмов (Х, КОЕ/м3), производили по формуле:

 

где N - количество колоний, выросших на чашке;

1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;

V - объем отобранной пробы воздуха, дм3

В результате определения in vitro эффективности противогрибкового препарата MycetoDez было установлено, что испытуемый препарат обладает фунгицидной активностью по отношению как к тест штамму Candida albicans ATCC 10231, так и к Aspergillus brasiliensis ATCC 16404.

Наиболее выраженный фунгицидный эффект отмечен в отношении Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, для которого фунгицидная концентрация составила 8,0 мкг/мл. В отношении Candida albicans ATCC 10231 - 16,0 мкг/мл, что также указывает на достаточно высокую фунгицидную активность. Данные противогрибковой активности препарата MycetoDez представлены в таблице 1.

Результаты исследования противогрибковой активности препарата MycetoDez при производственных испытаниях представлены в таблицах 2, 3 и на рисунках 1, 2.

Как видно из данных, приведенных в таблице 2 и рисунке 1, до обработки инкубатора № 2 выросло 52 КОЕ/чашку, что в пересчете согласно формуле (1), составит 208 КОЕ/м3, а после обработки выросло на 55 % меньше патогенных грибов - 23 КОЕ/чашка, что соответствует 92 КОЕ/м3.

Как видно из данных, приведенных в таблице 3 и рисунке 2, до обработки инкубатора № 1 выросло 43 КОЕ/чашку, что в пересчете согласно формуле (1), составит 172 КОЕ/м3, а после обработки выросло на 95 % патогенных грибов меньше - 2 КОЕ/чашка, что соответствует 8 КОЕ/м3.

Таким образом, из представленных выше данных, видно, что применение дезинфицирующего противогрибкового препарата MycetoDezв помещениях птицефабрики препятствует росту плесневых грибов. Полученные результаты показали, что при 30 минутном воздействии рост плесневых грибов снижается на 55 %, а через 12 часов после проведения дезинфекции рост плесневых грибов снижается на 95 %.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Дезинфицирующее средство MycetoDez, шашка дымовая обладает противогрибковой активностью в отношении плесневых грибков как в опытах in vitro, так и в производственных испытаниях.

Фунгицидные свойства исследуемого препарата сохраняются на высоком уровне вплоть до 12 часов с момента проведения дезинфекции, приводя к 95% гибели патогенных микроорганизмов. Полученные результаты специфической антимикотической активности испытуемого противогрибкового препарата MycetoDez свидетельствуют о перспективности его дальнейшего изучения на предмет использования в качестве фунгицида в ветеринарии и/или медицине.


Издательство АПК Эксперт: Животноводство. Птицеводство III кв. /30/2018г.



Список используемой литературы

1. Лихачев А.Н. Оппортунистическая микобиота помещений // Успехи медицинской микологии. – 2003 – Т.1. – №1. – С. 194-195

2. Каштанов А. В. Фунгицидная активность метацида // Успехи медицинской микологии. – 2003. – Т.1.–№1. – С. 98-100

3. Паразитарные и грибковые заболевания кур / Зооинженерный факультет МСХА. [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.activestudy.info/parazitarnye-i-gribkovye-zabolevaniya-kur/

4. Исабаев А.Ж., Орынтаева М.Д. Ветеринарно-санитарная экспертиза продукции птицеводства // Учебно-методическое пособие. – Костанай, 2016. – 120 с.

5. Гиндуллин А.И., Тремасов М.Я., Иванов А.В., Гиндуллина Д.А. Возможности применения пробиотиков в птицеводстве// Ветеринарная микология. – 2014. – Т.13. С.362-367

6. M38-2A «Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi». - Ed.2. – Vol. 28. - Nо 16/ CLSI. – Wayne, 2008. – 52 р.